UV-Detektor DWD-1 (Hochleistungs-Doppelstrahlwellenlänge) mit integrierter Datenverarbeitung

Wellenlängenbereich: 254nm, 280nm (gleichzeitige Detektion), zusätzlich zwischen 254nm, 280nm-400nm Spektrumlinien wählen Sie zwei Wellenlängen gleichzeitig detektieren.

Eigenschaften des DWD-1 Instruments

Protein 280nm/254nm Doppelwellenlängenmessung:

Proteinmoleküle enthalten aromatische Aminosäuren wie konjugierte doppelbindende Tyrosin und Trinin. Sie haben die Eigenschaft, UV-Licht zu absorbieren, ihre Absorptionsspitze bei 280 nm Wellenlänge, und der Wert der optischen Dichte der Absorption in dieser Wellenlänge ist proportional zu ihrer Konzentration, daher kann als Grundlage für die Qualifizierung und quantitative Bestimmung von Proteinen verwendet werden. Aus diesem Grund wird die UV-Absorptionsmethode bei 280 nm in der Regel für die kontinuierliche Überwachung der Proteinkonzentration in einem Layersystem verwendet. Da jedoch der Gehalt an Tyrosin und Trosin in verschiedenen Proteinen unterschiedlich ist, muss die genaue Menge bestimmt werden, dass das zu messende Protein als Standard verglichen wird oder sein Lichtdämpfungskoeffizient als Referenz bekannt ist. Darüber hinaus haben viele nicht-proteinische Substanzen auch eine bestimmte Absorptionsfähigkeit bei 280 nm Wellenlängen, die Störungen auftreten können. Insbesondere die Auswirkungen von Nukleensäuren (Purine und Pyridine) sind schwerer. Die Absorption bei 280 nm ist zehnmal stärker (pro Gramm) als das Protein, aber Nukleinsäure ist stärker bei 254 nm, deren Absorptionsspitze in der Nähe von 254 nm liegen. Die Nukleinsäure hat bei 254 nm doppelt so viel Licht wie bei 280 nm.

Proteine hingegen haben einen UV-Absorptionswert von 280 nm, der größer ist als der Absorptionswert von 254 nm.

Normalerweise：

Lichtabsorptionsverhältnis reiner Proteine: A280/A254" 1,8

Lichtabsorptionsverhältnis reiner Nukleinsäure: A280/A254

Wenn Nukleensäure in einer Proteinlösung gleichzeitig vorhanden ist (das ist in den meisten biologischen Systemen der Fall), muss die OD254nm und die OD280nm gleichzeitig gemessen werden. Anschließend wird der tatsächliche Proteingehalt anhand des Verhältnisses der Absorption beider Wellenlängen durch empirische Formeln korrigiert, um die Auswirkungen der Nukleinsäure zu beseitigen.

Proteinkonzentration = 1,45 x A280 - 0,74 x A254 (mg/ml)

Diese empirische Formel wurde durch eine Reihe von Daten bestimmt, die eine Mischung von Proteinen (Hefe Enololyse) und Nukleensäuren (Hefe Nukleensäure) in bekannten unterschiedlichen Konzentrationsverhältnissen.